ELISA实验出现异常的原因分析

ELISA实验是我们大家最常见的实验,也是比较容易出问题的实验,可能你一不小心,你的整个实验便是无功能重来那!所以小编给您讲解在使用ELISA试剂盒做实验的时候，有些细节若是做不好会出现实验异常，或者效果不佳，那么你有想过是什么原因吗？

一、白板异常：显色步骤结束后，酶标板所有孔均无颜色。阳性对照不显色。

1. 试剂已过效期，或不同试剂盒组分混用（解决方式：检查试剂的组分及批号，确认未过期以及所有组分均属对应的试剂盒。不同试剂盒或不同批号的试剂不能混用）。

2. 错加、漏加试剂底物、显色剂 A或B（解决方式：严格按说明书的步骤操作，加完试剂后可观察一下液面高度是否一致，以减少漏加现象）。

3. 洗板及加样过程中，酶标受污染失活失去催化显色剂显色的能力（解决方式：确认盛酶标的容器不含酶抑制剂如叠氮钠等，确认配制洗液的容器已洗干净）。

4. 终止液误作洗涤液稀释或当底物缓冲液配制（解决方式：每次配制时都应看清标签标明物质）。5. 蒸馏水有问题（解决方式：确认配制洗液的纯化水达到要求且未污染，与好蒸馏水比较）。·显色弱、灵敏度低：实验结束后，包括阳性对照、质控在内的所有板孔颜色均较淡。

二、阴阳性对照正常，但质控、参考品或个别弱阳性标本未能检出。

1. 未达要求的孵育温度及孵育时间可检出强阳性标本，但质控或弱阳性标本受 温度变化影响较大而被未检出（解决方式：质控品或标本避免反复冻融。标本在一周内使用的，可存于 2-8℃，如需长期保存，应置于-20℃以下保存。质控品应小量分装，并置于-20℃以下保存）。

2. 质控品或标本高温放置过久，或被反复冻融致待测物滴度下降，而未能检出（解决方式：重新设定酶标仪的参数，特别是检查滤光片是否匹配）。

3. 仪器设定不正确，滤光片不匹配（解决方式：重新设定酶标仪的参数，特别是检查滤光片是否匹配）。

三、实验结束后，阴阳性对照正常，质控正常，但临床标本感觉显色较弱

1. 待测标本中可能不含强阳性标本，故结果可能是正常的（解决方式：如有怀疑，可复检）。

2. 标本加入叠氮钠作为防腐剂（解决方式：酶免实验中的标本禁用叠氮钠作为防腐剂，可选用 proclin、硫柳汞等其他防腐剂）。