ELISA试剂盒技术

ELISA原理

ELISA利用抗原抗体之间专一性结合之特性，对标本进行检测；由于结合与固体承载物（一般为塑胶孔盘）上之抗原或抗体仍可具有免疫活性，因此设计其结合机制後，配合酵素显色反应，即可显示特定抗原或抗体是否存在，并可利用显色之深浅进行定量分析。根据待测样品与结合机制的不同，ELISA可设计出各种不同类型的检测方式，主要以"三明治法"(sandwich)、"间接法"(indirect)、以及"竞争法"(Competitive)三种为主，以下 为各种方法之介绍。

ELISA分类

见ELISA的双抗夹心法原理；

ELISA的双抗夹心法，又称"三明治法"。

三明治法常用于检测大分子抗原，一般之操作步骤为：

将具有专一性之抗体固着(coating)于塑料孔盘上，完成後洗去多馀抗体；

加入待测标本，标本中若含有待测之抗原，则其会与塑料孔盘上的抗体进行专一性结合；

洗去多馀待测标本，加入标记有酵素之二次抗体，与抗原结合；

洗去多馀未结合的二次抗体，加入酵素受体使呈色，以肉眼或仪器读取显色结果。

三明治法分别以两种抗体对标本中的抗原进行两次专一性辨认，因此专一性相当高，但此待测抗原必须是多价抗原，如此才可获得两种以上的专一性抗体，以分别进行夹心；而且此法需要足够的表位空间以进行抗原抗体的夹心，所以并不适用于半抗原或小分子抗原等分子量较小之标的。

ELISA双抗夹心法的衍生方法如ABC法：ELISA的生物素 -亲和素系统，该产品系列是检测方法上的重要革命。生物素/亲和素系统用于ELISA一般有三种形式，即桥联法（BAB）、标记法 （BA）和ABC法，不少学者用之检测了不同的抗原—抗体系统均取得了较好的结果，其中以BA法和ABC法应用较多，敏感性一般比常规ELISA法高 4～80倍。

LISA的间接法：

间接法常用于检测抗体，一般之操作步骤为：

将已知之抗原固着于塑胶孔盘上，完成後洗去多馀之抗原；

加入待测标本，标本中若含有待测之一次抗体，则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性结合；

洗去多馀待测标本，加入带有酵素之二次抗体，与待测之一次抗体结合；

洗去多馀未结合的二次抗体，加入酵素受体使酵素显色，以肉眼或仪器读取显色结果。

ELISA的竞争法原理；

竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制，一般用于检测小分子抗原，其操作步骤为：

将具有专一性之抗体固着于塑胶孔盘上，完成後洗去多馀抗体；

加入待测标本，使标本中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行专一性结合；

加入带有酵素之抗原，此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行专一性结合，由于塑胶孔盘上固着的抗体数量有限，因此当标本中抗原的量越多，则带有酵素之抗原可结合的固着抗体就越少，亦即，两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗体结合，即所谓竞争法之由来。

洗去标本与带有酵素之抗原，加入酵素受体使酵素显色，当标本中抗原量越多，代表塑胶孔盘内留下的带有酵素的抗原越少，颜色也就越浅。

当需要检测无法获得两种以上单一性抗体的抗原，或是不易得到足够的纯化抗体以固着在塑胶孔盘上时，一般会考虑使用竞争法ELISA。

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