植物苹果酸酶(malic enzyme)ELISA试剂盒

植物苹果酸酶(malic enzyme)ELISA试剂盒

ELISA法是免疫诊断中的一项新技术，现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定，根据已经使用的结果，认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查，而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此，也适合于血清流行病学调查。本法不仅可以用来测定抗ti，而且也可用于测定体液中的循环抗原，所以也是一种早期诊断的良好方法。因此ELISA法在生物医学各领域的应用范围日益扩大，

免责声明

1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。

2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。

3. 产品特点

一、高效、灵敏、特异的抗ti；

二、稳定的重复性和可靠性；

三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体；

四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型；

五、节省实验经费。

elisa试剂盒回收率是反应待测物在样品分析过程中的损失的程度，损失越少，回收率越高，如果作标液1PPM，就是1毫克/升，而作出标准数据为0.99毫克/升，就是说你的回收率是99%，这个与真实成分有密切的关系，说明方法的准确度。比如水中总无机氯含量测定，样品水中含有无机氯20mg/L，取100mL被测水样品，加入0.1mL浓度为10mg/mL的含无机氯标准样品，测定时忽略体积变化，如果测定出样品中无机氯为29.8mg/L，则认为回收率为99%。

植物苹果酸酶(malic enzyme)ELISA试剂盒

实验过程:

1.试剂准备:所有试剂都必须在使用前达到室温,使用后请立即按照说明书要求保存试剂。实验操作中请 使用一次性的吸头,避免交叉污染。

2.加样:加样或加试剂时，请注意在吸取标本/标准品，酶结合物或底物时，第yi个孔与最hou-一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的“预孵育“时间,从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品) 将控制在10分钟内,如标本数量多,推荐使用多道移液器加样。

3.孵育:为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发;洗板后应尽快进行下步操作,任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态:同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。

4.洗涤:洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响最hou的酶标仪读数。

常见问题解析：

1、试剂的选择：选择优良试剂大家都是知道的，但是在检测之前还应该提前半个小时将试剂拿到常温下进行解冻。

2、加样中可能遇到的问题。

3、洗板时容易造成误差。

4、显色问题：使用了过期的显色剂或者是显色剂用过后放置时间太长，都有可能造成显色剂不显色。

5、终止反应：在加终止剂的时候由于倾倒速度快，产生气泡，造成假阳性结果，所以在倒终止剂的时候要缓慢倒。

6、读板：读板的时候首先应该保证板的清洁干净。

常用方法及原理如下：

1. 夹心法：

夹心法常用于检测大分子抗原，一般的操作步骤为:

a. 将具有专一性的抗ti固著（coating）于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗ti

b. 加入待测检体，检体中若含有待测的抗原，则其会与塑胶孔盘上的抗ti进行专一性键结

c. 洗去多余待测检体，加入另一种对抗原专一的一次抗ti，与待测抗原进行键结

d. 洗去多余未键结一次抗ti，加入带有酶的二次抗ti，与一次抗ti键结

e. 洗去多余未键结二次抗ti，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或仪器读取呈色结果

原理：针对抗原分子上2个不同抗原决定簇的单克隆抗ti分别作为固相抗ti和酶标抗ti，将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物。

2. 间接法

间接法常用于检测抗ti，一般的操作步骤为：

a. 将已知的抗原固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余的抗原。

b. 加入待测检体，检体中若含有待测的一次抗ti，则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结。

c. 洗去多余待测检体，加入带有酶的二次抗ti，与待测的一次抗ti键结。

d. 洗去多余未键结二次抗ti，加入酶底物使酶呈色，藉仪器（ELISA reader）测定塑胶盘中的吸光值（OD值），以评估有色终产物的含量即可测量待测抗ti的含量。

原理：利用酶标记的抗抗ti以检测已与固相结合的受检抗ti。

3. 竞争法

竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制，一般用于检测小分子抗原，其操作步骤为：

a. 将具有专一性的抗ti固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗ti

b. 加入待测检体，使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗ti进行专一性键结

c. 加入带有酶的抗原，此抗原也可与塑胶孔盘上的抗ti进行专一性键结，由于塑胶孔盘上固著的抗ti数量有限，因此当检体中抗原的量越多，则带有酶的抗原可键结的固著抗ti就越少，亦即，两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗ti键结，即所谓竞争法之由来。

d. 洗去检体与带有酶的抗原，加入酶底物使酶呈色，当检体中抗原量越多，代表塑胶孔盘内留下之带有酶的抗原越少，显色也就越浅。

e. 当需要侦测无法获得两种以上单一性抗ti的抗原，或是不易得到足够的纯化抗ti以固著于孔盘上时，一般会考虑使用竞争法ELISA。

[说 明]

1.由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的所有原料进行全面的鉴定与分析，本产品可能存在一定的质量 技术风险。

2.最终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及 当时的实验环境密切相关，请务必准备充足的标本备份。

3.不同批次的同一产品可能会有少许差别，如:检测限、灵敏度以及显色时间等，请依据试剂盒内说明书进行实验操作，网站电子版说明书仅作参考。

4.只有全部使用本试剂盒配套试剂才能保证检测效果，不能混用其他制造商的产品。只有严格遵守本试剂盒的实验说明才会得到最jia的检测结果。

5.本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。

6.使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致ELISA实验结果偏差。

7.若样本为细胞培养上清，因该类样本干扰因素较多，如:细胞状态、细胞数量、采样时间等，所以可能存在检测不出的情况。

8.某些天然蛋白或重组蛋白，包括原核及真核重组蛋白，可能因为与本产品所使用的检测抗ti及捕获抗ti不匹配，而不被检测出。

深圳瑞清生物信息科技有限公司经过数年的努力发展已迅速成为集产品研发、经营为一体的专业化生物工程公司。公司具有完善的实验技术开发平台，成熟的抗原、抗体研发系统，熟练掌握各种酶联技术，结合公司的研发团队，可以有效的保证公司产品强的稳定性和高的准确性，同时又具有竞争力的价格。 公司主营ELISA试剂盒，目前可以提供生化试剂、分子生物学试剂及试剂盒，各种抗体及免疫学试剂盒、实验耗材等多门类上万种产品，产品涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学的各个领域。