人黑色素瘤(MART/Melan-A)ELISA试剂盒

人黑色素瘤(MART/Melan-A)ELISA试剂盒

ELISA法是免疫诊断中的一项新技术，现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定，根据已经使用的结果，认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查，而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此，也适合于血清流行病学调查。本法不仅可以用来测定抗ti，而且也可用于测定体液中的循环抗原，所以也是一种早期诊断的良好方法。因此ELISA法在生物医学各领域的应用范围日益扩大，

免责声明

1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。

2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。

3. 产品特点

一、高效、灵敏、特异的抗ti；

二、稳定的重复性和可靠性；

三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体；

四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型；

五、节省实验经费。

elisa试剂盒回收率是反应待测物在样品分析过程中的损失的程度，损失越少，回收率越高，如果作标液1PPM，就是1毫克/升，而作出标准数据为0.99毫克/升，就是说你的回收率是99%，这个与真实成分有密切的关系，说明方法的准确度。比如水中总无机氯含量测定，样品水中含有无机氯20mg/L，取100mL被测水样品，加入0.1mL浓度为10mg/mL的含无机氯标准样品，测定时忽略体积变化，如果测定出样品中无机氯为29.8mg/L，则认为回收率为99%。

人黑色素瘤(MART/Melan-A)ELISA试剂盒

实验过程:

1.试剂准备:所有试剂都必须在使用前达到室温,使用后请立即按照说明书要求保存试剂。实验操作中请 使用一次性的吸头,避免交叉污染。

2.加样:加样或加试剂时，请注意在吸取标本/标准品，酶结合物或底物时，第yi个孔与最hou-一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的“预孵育“时间,从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品) 将控制在10分钟内,如标本数量多,推荐使用多道移液器加样。

3.孵育:为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发;洗板后应尽快进行下步操作,任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态:同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。

4.洗涤:洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响最hou的酶标仪读数。

常见问题解析：

1、试剂的选择：选择优良试剂大家都是知道的，但是在检测之前还应该提前半个小时将试剂拿到常温下进行解冻。

2、加样中可能遇到的问题。

3、洗板时容易造成误差。

4、显色问题：使用了过期的显色剂或者是显色剂用过后放置时间太长，都有可能造成显色剂不显色。

5、终止反应：在加终止剂的时候由于倾倒速度快，产生气泡，造成假阳性结果，所以在倒终止剂的时候要缓慢倒。

6、读板：读板的时候首先应该保证板的清洁干净。

常用方法及原理如下：

1. 夹心法：

夹心法常用于检测大分子抗原，一般的操作步骤为:

a. 将具有专一性的抗ti固著（coating）于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗ti

b. 加入待测检体，检体中若含有待测的抗原，则其会与塑胶孔盘上的抗ti进行专一性键结

c. 洗去多余待测检体，加入另一种对抗原专一的一次抗ti，与待测抗原进行键结

d. 洗去多余未键结一次抗ti，加入带有酶的二次抗ti，与一次抗ti键结

e. 洗去多余未键结二次抗ti，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或仪器读取呈色结果

原理：针对抗原分子上2个不同抗原决定簇的单克隆抗ti分别作为固相抗ti和酶标抗ti，将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物。

2. 间接法

间接法常用于检测抗ti，一般的操作步骤为：

a. 将已知的抗原固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余的抗原。

b. 加入待测检体，检体中若含有待测的一次抗ti，则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结。

c. 洗去多余待测检体，加入带有酶的二次抗ti，与待测的一次抗ti键结。

d. 洗去多余未键结二次抗ti，加入酶底物使酶呈色，藉仪器（ELISA reader）测定塑胶盘中的吸光值（OD值），以评估有色终产物的含量即可测量待测抗ti的含量。

原理：利用酶标记的抗抗ti以检测已与固相结合的受检抗ti。

3. 竞争法

竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制，一般用于检测小分子抗原，其操作步骤为：

a. 将具有专一性的抗ti固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗ti

b. 加入待测检体，使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗ti进行专一性键结

c. 加入带有酶的抗原，此抗原也可与塑胶孔盘上的抗ti进行专一性键结，由于塑胶孔盘上固著的抗ti数量有限，因此当检体中抗原的量越多，则带有酶的抗原可键结的固著抗ti就越少，亦即，两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗ti键结，即所谓竞争法之由来。

d. 洗去检体与带有酶的抗原，加入酶底物使酶呈色，当检体中抗原量越多，代表塑胶孔盘内留下之带有酶的抗原越少，显色也就越浅。

e. 当需要侦测无法获得两种以上单一性抗ti的抗原，或是不易得到足够的纯化抗ti以固著于孔盘上时，一般会考虑使用竞争法ELISA。

试剂和样本的控制方法:

一、试剂

1.试剂的选择:国家明确要求要采用批批检定的形式对ELISA试剂严格把关,我司严格按照国家标准进行生产,已获得国家承认的“三证",每一个产品都有对应的生产批号,只要客户提前下单,我们就能为您提供新批次的产品,不必担心会有过期的试剂。我司的试剂,值得您选择。

2.试剂的准备:先将试剂盒先从冰箱中拿出来,在室温下放置20-30 min后,再进行测定,使试剂盒在使用前与室温平衡,这样做的目的能使反应微孔内的温度较快地达到所需的温度,以满足后面的测定需求。

二、样本

1.内源性干扰因素:包括类因子、补体、高浓度的非特异免疫球蛋白、异嗜性抗体、某些自身抗体等;

类因子的控制方法:

①用F(ab)2替代完整的IgG;

②标本用联有热变性IgG的固相吸附剂处理;

③检测抗原时,可用2-巯ji乙醇加入到标本稀释液中使RF降解;

补体的控制方法:

①用EDTA稀释标本;

②56℃ 30 min加热血清使C1q灭活;

2.外源性干扰因素:包括标本溶血、细菌污染、保存时间过长或凝固不全等;

控制方法:采血时规范操作,采集的血液勿用力震荡,以防溶血;收集标本时采用无菌试管,经检测后再低温冻存;保存时间不宜过久,检测时尽量采用新鲜标本;对于凝固不全的血标本可适当加入抗凝剂,并放入37℃水中1 h,待充分凝固后再离心分离血清。

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